nest共聚焦皿和共聚焦板使用方法

NEST玻底培養(yǎng)皿和玻底培養(yǎng)板使用方法

近日來很多客戶向我們咨詢NEST玻底皿/板的使用方法，這里我們將NEST玻底皿/板的常規(guī)使用方法刊登出來供大家參考。

1 預(yù)平衡：在玻底培養(yǎng)皿加入3ml培養(yǎng)液，在培養(yǎng)箱中放置15分鐘。

2 加細胞：吸去培養(yǎng)液，在底孔中加入500ul含細胞的培養(yǎng)液。在培養(yǎng)箱中放置2小時，

讓細胞沉降貼壁。

3 加培養(yǎng)液：小心加入2-3ml不含細胞的培養(yǎng)液。該步驟用于為細胞提供足夠的培養(yǎng)

液，同時減少由于水份揮發(fā)帶來的滲透壓的變化。

*根據(jù)實驗的要求，可以合并步驟2和3，在預(yù)平衡后直接加入2-3毫升含細胞的培養(yǎng)液。

多聚賴氨酸包被

1. 將濃度0.01%（100ug/mL）的多聚賴氨酸溶液加入玻底板或玻底皿中（爬片可置于普通皿內(nèi)進行加液），以剛好蓋滿玻底（或玻片）為準，將上蓋蓋好，放到培養(yǎng)箱中(37℃ 5%CO2)包被30分鐘。

2. 30分鐘后取出板或皿，用吸管將多余的多聚賴氨酸溶液吸出。換吸管，加入三蒸水，沒過底，沖洗三次，再將水吸出來。反復(fù)三次。整個過程需在無菌操作臺上進行，并且保證吸管無菌。

3. zui后將鋪好的板（或皿）放于培養(yǎng)箱待用。

多聚賴氨酸及明膠包被方法

多聚賴氨酸（分子量30000-70000），用0.1M硼酸 /NaOH緩沖液PH8.4 （高壓滅菌）做100倍稀釋成200μg/mL應(yīng)用液，0.22μm濾膜（可用一次性針頭過濾器CA 0.22μm）過濾。PLL滴加于培養(yǎng)面上，保證全部覆蓋，室溫guoye。次日吸去多余部分（可回收），雙蒸水洗兩遍，置于超凈臺中紫外線下風(fēng)機吹干即可。

明膠母液（2%濃度）用去離子水稀釋成濃度1%（或0.1%，有條件的建議多嘗試下，確定zui符合自己用的濃度），國產(chǎn)或進口均可。建議配置好的包被液做一次高溫高壓滅菌。將包被液滴加在培養(yǎng)面上，保證全部覆蓋，37℃包被1~2小時，或4℃冰箱guoye，待用時取出吸去多余部分，可用培養(yǎng)液清洗1~2次后使用